SPE技術儀器裝置（十）固相萃取柱的重復使用

問   題

原   因

解 決 方 法

在用反相SPE柱萃取時，洗脫餾份中有水。

1. 分析物洗脫之前SPE柱沒有很好的干燥。

1. 用氮氣或空氣干燥SPE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水將SPE柱上的殘留水分除去。

zui后餾份中含有干擾物。

1. 干擾物與分析物被同時洗脫。

2. 干擾物來自SPE柱。

1. 在洗脫分析物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱。可將兩種或更多中兼容的溶劑混合以達到不同的極性。

選用對分析物親合力更大而對干擾物親合力低的SPE柱。

用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱然后離子交換柱或硅膠柱。

 2. 在柱子預處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。

SPE柱流速降低或阻塞。

1. 樣品存在過多的顆粒。

2. 樣品溶液粘度太大。

1. 對樣品進行過濾或離心。

2. 用溶劑對樣品進行稀釋。

反相柱從固態樣品中用萃取非極性分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用甲醇、異丙醇或乙腈對樣品進行均漿處理。然后過濾或離心，再用水對清液進行稀釋為含水量為70-90%的水溶液。

用正相柱從固態樣品中萃取分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用非極性溶劑 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。

用正相柱從脂肪樣品中萃取分析物。

1. 脂肪可與分析物一起被洗脫出來或降低SPE柱的吸附容量。

1. 用正己烷溶解脂肪。冰凍除去凝結的脂肪。

用反相柱從含蛋白質的溶液中(、清、漿)萃取分析物。

1. 分析物與蛋白質鍵合使分析物通過SPE柱而沒有被保留。

1. 通過改變樣品的pH值或用水對樣品稀釋破壞蛋白鍵合。

2. 加酸除蛋白質 (如: HCIO4、TFA、TCA)。

3. 加有機溶劑除蛋白質 (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。離心、然后用水或緩沖溶液將上清液稀釋至有機溶劑含量少于10%。

從含有表面活性劑的溶液中萃取分析物。

1. 表面活性劑與SPE柱表面起作用。

1. 如果分析物是非離子狀態，可用離子交換柱除去表面活性劑離子。

2. 用二醇基柱除去非離子化的表面活性劑。

用常規柱 (60?)萃。取蛋白質的回收率低。

1. 蛋白質體積太大不能進入萃取柱的微孔。

2. 蛋白質不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白質在SPE柱擔體微孔內變性。

1. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

2. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

分析物回收率低

被吸附在萃取柱上

(如分析物與基液一起通過SPE柱)      

1. SPE柱沒有很好地被預處理。

2. SPE柱的極性不合適。

3. 分析物對樣品溶液的親合力遠遠大于對SPE柱的親合力。

4. 當大體積水樣品。

5. 通過SPE柱時，反相柱擔體失去柱子預處理時留下的甲醇。

1. 反相柱: 用甲醇、異丙醇或乙腈處理柱子，然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子。注意不能讓SPE柱變干。

2. 選擇對分析物有明顯選擇性的SPE柱。

3. 改變極性或樣品溶液的pH使分析物在樣品溶液中的親合力降低。

4. 在樣品溶液中加入1-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。

分析物回收率低

分析物沒有被洗脫出SPE柱                

1. SPE柱的極性不合適。

2. 洗脫溶劑不夠強，無法將分析物從SPE柱上洗脫。

3. 洗脫溶劑體積太小

4. 分析物被不可逆地吸附在SPE擔體上。擔體-分析物作用力太強。

1. 選擇其它低極性或選擇性弱的SPE柱。

2. 改變洗脫溶劑的pH值以增加其對分析物的親合力。

3. 增加溶劑體積。

4. 反相: 選擇疏水性弱的擔體。如果原來用的是C18，則改為C8、C2或CN。

陽離子交換: 用羧酸取代苯磺酸。

陰離子交換: 用伯、仲胺代替叔胺。

萃取重現性差

1. 在添加樣品之前SPE柱已枯。

2. SPE柱超容量。

3. 樣品過柱流速太快。

 4. 洗脫液流速太快。

 5. 分析物在樣品中的溶解度太大，分析物在樣品過柱時與樣品同時通過柱子而沒有被保留。

6. SPE柱用極性溶劑處理而洗脫溶劑是不兼容的非極性溶劑。

 7. 洗滌雜質用的溶劑太強，部分分析物與雜質同時被從SPE柱洗滌。分析物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速、SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。

8. 洗脫劑的體積太小。

1. 重新進行SPE柱預處理。

2. 減少樣品量或選擇大容量柱。

3. 降低流速。特別是離子交換時流速應低于5 mL/min。

4.在使用外力之前讓洗脫液滲透過柱。兩次500微升洗脫可能比一次1000微升更有效。

 5. 通過改變樣品極性或pH值而改變分析物的溶解度。

6. 在使用非極性溶劑之前對SPE柱進行干燥。

7. 降低洗滌溶劑的強度。

8.  增加洗脫溶劑的體積。